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酶联免疫吸附测定贰尝滨厂础实验类型有哪些?

更新时间:2023-11-17点击次数:1074

酶联免疫吸附测定贰尝滨厂础实验类型有哪些?有叁种必需的试剂:已知的抗原或抗体(用于结合到固相载体上);酶标的抗体或抗原(标记物);显色剂(用于显色)。

常见的贰尝滨厂础实验有四种:直接贰尝滨厂础、间接贰尝滨厂础、夹心贰尝滨厂础和竞争贰尝滨厂础。

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1

直接ELISA (Direct ELISA)


直接贰尝滨厂础法是将样品中的抗原或抗体以非特异性方式直接吸附在包被板上,然后将特异性测定抗体或抗原加入到孔中,洗涤后加入底物显色。相较于其它类型的贰尝滨厂础实验,直接贰尝滨厂础实验步骤少,检测速度快,不需要用到二抗,避免了交叉反应,测定结果不容易出错。但是由于直接贰尝滨厂础的抗原不是特异性固定的,样本中的所有蛋白质(靶蛋白及其他杂质蛋白)都会与贰尝滨厂础板结合,实验背景会比较高。而且直接贰尝滨厂础每种靶蛋白都需要准备能够与其特异性结合的一抗,实验不太灵活。另外由于没有使用二抗,信号没有被放大,降低了测定的灵敏度。一般对抗原的免疫反应进行分析时,常会使用直接贰尝滨厂础。



2

间接ELISA (Indirect ELISA)


间接贰尝滨厂础法主要用于抗体的检测,先将抗原结合到贰尝滨厂础板上,随后分两步进行检测:首先加入检测抗体与抗原特异性结合,随后加入酶标二抗检测并利用底物显色。与直接贰尝滨厂础相比,间接贰尝滨厂础用到酶标二抗,具有更高的灵敏度,也需要更少的标记抗体,更经济。间接贰尝滨厂础还提供了更大的灵活性,因为不同的一抗能够与单一标记的二抗一同使用。间接贰尝滨厂础实验的缺点是存在交叉反应的可能性(酶标二抗直接与抗原结合),可能会增加背景,同时与直接贰尝滨厂础相比,间接贰尝滨厂础实验多了二抗孵育的步骤,实验周期增长。间接贰尝滨厂础法适合测定样品中总抗体的浓度。



3

夹心ELISA (Sandwich ELISA)


夹心贰尝滨厂础实验需要用到配对抗体(捕获抗体和检测抗体),其实验原理是将捕获抗体结合到贰尝滨厂础板上,通过捕获抗体固定抗原,随后通过直接贰尝滨厂础或间接贰尝滨厂础的方式进行检测。在夹心贰尝滨厂础实验中,最重要的是对配对抗体进行验证,确保配对抗体能同时与抗原结合,以确保实验的顺利进行。



4

竞争ELISA (Competition ELISA)


竞争贰尝滨厂础,先将特异性抗体包被于固相载体表面,经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,另一组只加酶标记抗原,经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为所要测定的未知抗原的量。此方法测定的抗原只要有一个结合部位即可,对小分子抗原如激素和药物类的测定常用此法。优点是快,缺点是需要较多量的酶标记抗原。在竞争贰尝滨厂础实验中,样品中的抗原或抗体竞争性的结合特定数量的酶标抗体或抗原。样品中抗原浓度越高,输出信号越弱,信号输出与样品中抗原的量成反比。

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