在基因功能研究、蛋白质表达和细胞治疗等领域,高效的基因转染技术是实验成功的关键。Polysciences PEI 转染试剂凭借其卓颈越的性能和广泛的适用性,成为全球科研工作者和生物技术公司的首颈选工具。本文将深入解析其核心优势、使用技巧及典型应用场景,助您快速掌握这一高效转染方案。
1. 高效性与广谱适用性
PEI(聚乙烯亚胺)作为阳离子聚合物,通过静电作用与DNA结合形成稳定复合物,高效穿透细胞膜,尤其适用于难转染的细胞系(如原代细胞、悬浮细胞)。其转染效率在HEK293、CHO、昆虫细胞等常见模型中表现优异,甚至超越脂质体试剂。
2. 低细胞毒性,高兼容性
&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;与部分传统转染试剂相比,Polysciences PEI 经过优化配方处理,显着降低细胞毒性,确保转染后细胞活性维持在较高水平,适用于长期基因表达实验。
3. 成本效益显着
PEI试剂价格远低于脂质体或病毒载体,且用量少,适合大规模生产(如重组蛋白、抗体药物开发),大幅降低实验室或工业级实验成本。
4. 操作简便,稳定性强
&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;无需复杂步骤或特殊设备,试剂与DNA混合后即可使用,且可在4°C长期保存,避免反复冻融对效果的影响。
实验准备
- 细胞状态:确保细胞处于对数生长期,融合度达70%-80%。
- 试剂比例:DNA与PEI的比例需优化(常用范围1:2至1:4),不同细胞系需预实验确定最佳配比。
操作流程
1. 复合物制备:将稀释后的PEI与DNA在无血清培养基中混合,静置15-30分钟。
2. 转染处理:将复合物逐滴加入细胞培养基,轻柔混匀后继续培养。
3. 结果检测:通常在24-72小时后通过荧光显微镜(GFP标记)、Western Blot或qPCR评估转染效率。
优化建议
- 对于敏感细胞,可在转染4-6小时后更换新鲜培养基以减少毒性。
- 使用血清培养基时,需确保复合物形成阶段使用无血清环境以避免干扰。
1. 重组蛋白生产
&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;在CHO细胞中,Polysciences PEI 成功实现高表达量单克隆抗体的稳定生产,被多家生物制药公司用于临床级蛋白制备。
2. 基因编辑(CRISPR/Cas9)
&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;通过PEI递送Cas9质粒与sgRNA,在神经干细胞中实现高效基因敲除,助力神经退行性疾病机制研究。
3. 病毒载体包装
&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;与慢病毒或腺病毒包装系统联用,显着提高病毒滴度,广泛应用于基因治疗研究。
Q1:转染后细胞死亡较多,如何解决?
- 降低PEI/DNA比例或复合物孵育时间。
- 转染后4-6小时更换培养基,减少试剂暴露时间。
Q2:悬浮细胞转染效率低怎么办?
- 优化离心转染法(如使用Pluronic F-68增强复合物接触)。
- 调整细胞密度至1×10^6 cells/mL,并增加DNA用量。
Q3:能否用于体内转染?
- PEI适用于局部注射(如肿瘤模型),但需注意剂量控制以避免免疫反应。推荐使用体内专用修饰型PEI试剂。
特性 | Polysciences PEI | 脂质体试剂 | 病毒载体 |
转染效率 | 高(广谱) | 中高(依赖细胞) | 极颈高 |
细胞毒性 | 低 | 中高 | 低(但存在生物风险) |
成本 | 低 | 高 | 极颈高 |
实验周期 | 短(24-48小时) | 短 | 长(需包装病毒) |
适用场景 | 常规研究、大规模生产 | 贴壁细胞 | 难转染细胞、体内 |
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