E.coli残留DNA检测试剂盒(qPCR-荧光探针法)是一款基于Taqman探针技术的科研级检测工具,专为精准定量生物制品(如疫苗、基因治疗药物)中的大肠杆菌宿主细胞DNA残留而设计。该试剂盒结合高灵敏度荧光定量PCR技术,检测限低至3×10?fg/μL,支持从中间品到成品的全流程质量控制,为生物制药行业提供高效、可靠的检测方案。
- 超高灵敏度:检测范围覆盖3×10?fg/μL至3×10?fg/μL,最颈低检测限达fg级,满足严苛质控需求。
- 国家标准品配套:采用国家标准的E.coli DNA定量参考品,确保数据准确性与可溯源性。
- 广泛仪器兼容性:适配ABI7500、BioRad CFX96、Roche LightCycler 480等主流qPCR仪器(需根据机型选择ROX参比染料)。
- 操作便捷:即用型试剂设计,配合前处理试剂盒(货号HG-CL100),简化实验流程。
- 生物制药生产:监测重组蛋白、抗体药物中宿主DNA残留,确保成品安全性。
- 基因治疗研发:评估病毒载体或基因编辑产物的纯度。
- 科研实验:用于微生物学、分子生物学研究中的DNA定量分析。
检测原理(采用Taqman探针法):
1. 探针标记:荧光探针与目标DNA特异性结合,PCR扩增时探针水解释放荧光信号。
2. 实时定量:通过荧光强度变化(FAM通道)实时监测DNA扩增,结合标准曲线计算残留量。
1. 样品前处理:使用配套试剂盒(HG-CL100)提取纯化DNA。
2. 标准品稀释:按梯度稀释国家参考品(ST0-ST5),制备标准曲线。
标准品代号 | 稀释体积 | 浓度(蹿驳/μ尝) |
ST0 | 10μ尝 E.coli DNA 定量参考品 + 90μL DNA 稀释液 | 3 ×106 |
ST1 | 10μ尝 ST0 + 90μL DNA 稀释液 | 3 ×105 |
ST2 | 10μ尝 ST1 + 90μL DNA 稀释液 | 3 ×104 |
ST3 | 10μ尝 ST2 + 90μL DNA 稀释液 | 3 ×103 |
ST4 | 10μ尝 ST3 + 90μL DNA 稀释液 | 3 ×102 |
ST5 | 10μ尝 ST4 + 90μL DNA 稀释液 | 3 ×101 |
3. 反应体系配置:混合2×qPCR缓冲液、引物探针Mix及适配ROX,加入待测样本。
4. qPCR程序运行:
- 预变性:95℃ 10分钟
- 40次循环:95℃ 15秒 → 60℃ 60秒(荧光采集)
5. 数据分析:通过Ct值计算样本浓度,验证标曲线性(R?>0.98)与加标回收率(50%-150%)。
Q:阴性对照(NTC/NCS)出现信号怎么办?
A:可能是交叉污染或试剂失效,建议更换吸头、分区操作,并检查试剂有效期。
Q:标曲扩增效率不达标如何处理?
A:优化引物探针浓度,确保标准品稀释准确,避免反复冻融。
Q:如何选择ROX参比染料?
A:参照说明书中的机型适配表,或联系技术支持获取定制建议。
- 未开封试剂盒:-20℃保存,有效期18个月。
- 开封后:避免反复冻融,ROX染料需严格避光。
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