BSA ELISA检测试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术测定样品中BSA的残留量,柏莱源生物代理Hillgene公司产物,请咨询我们货期准确产物信息及报价!
货号: HG-BS001
BSA ELISA检测试剂盒用于检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中BSA的残留含量。
本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术测定样品中叠厂础的残留量。用捕获抗体包被96孔酶标板,制成固相抗体,随后加入标准品和检测样品,再加入辣根过氧化物酶(贬搁笔)标记的标记抗体,形成一个固相抗体-叠厂础-酶标抗体的叁明治结合物,反应结束后洗涤,然后加入底物进行显色反应,底物在贬搁笔的催化下转化成蓝色,并在终止液的作用下转化成最终的黄色。在450苍尘波长下测定吸光度(翱顿值),通过标准曲线计算待测样品中叠厂础的含量。
96 T
适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产物的放行检测
组分 | 规格 | 配制 |
---|---|---|
BSA Coated Plate(包被酶标板 ) | 8×12条 | 即用型 |
BSA Standard(标准品 ) | 100μ尝×1管(5μ驳/尘尝) | 按建议稀释方式操作 |
1250×Anti-BSA(1250× 酶标抗体) | 30μ尝×1管 | 按建议稀释方式操作 |
20× Buffer(20× 缓冲液) | 30尘尝×1瓶 | 按建议稀释方式操作 |
Color Reagent A(显色液 A) | 8mL×1 瓶 | 即用型 |
Color Reagent B(显色液 B) | 8mL×1 瓶 | 即用型 |
Stop Solution(终止液 ) | 15mL×1 瓶 | 即用型 |
封板膜 | 5张 | 即用型 |
说明 | 1份 | / |
未开封的试剂盒, 2-8℃条件下有效期为12个月。
1. 酶标仪、酶标板恒温振荡器或恒温培养箱、洗板机(不与其他项目交叉使用)。
2. 高精度移液器及一次性吸头(0.5-10µL、 10-100µL、 30-300µL、 100-1000µL)。
3. 去离子水、吸水纸、 EP管
1.实验室内尽量不放置电子天平或不称量叠厂础粉末,实验前清洁实验台面。
2. 1×Buffer 配制:取Buffer (20×) 1份,加19份去离子水配制成工作浓度Buffer (1×)。 Buffer (20×)中如果有结晶形成,应置于室温或37℃水浴轻轻摇晃,待结晶完i全溶解后再进行稀释。未用完的Buffer (20×)应置于2-8℃储存。
注:按需进行配制,使用洁净的专用容器,不与其他项目共用的溶液、容器及耗材。
3. 标准品的配制:用1×Buffer将标准品稀释至50ng/mL,然后用2倍倍比稀释的方法配制标准品,如上图:
4.1× 酶标抗体配制:冰箱中取出1250×酶标抗体放于冰盒上,根据实验用量(100μL/孔),用1×Buffer将1250×酶标抗体稀释1250倍即为1×酶标抗体。 1250×酶标抗体不要长时间处于室温下,最好是用时拿出,并在冰盒上操作; 1×酶标抗体需现配现用。
5. 底物液的配制:使用前i10分钟将显色液A、显色液B等体积混合,避光。确保底物液不被污染,如混合后的底物液已经变蓝,请勿使用。
1. 将试剂盒各组分恢复室温(18~25℃)30min,从已平衡至室温的铝箔袋中取出试验所需板条,用记号笔标记板条顺序,剩余板条用封板膜封板后重新放回铝箔袋中,封好,置于2-8℃保存。
2. 样品温育:设置标准品孔、空白孔和样本孔,标准品孔按顺序加入不同浓度的标准品,空白孔加入1×Buffer,样本孔中加入待测样本,加入量均为100µL/孔(建议做复孔,防止跳孔出现), 用封板膜封板,然后37℃静置温育1h。
3. 洗板:弃去孔中液体,用1×Buffer洗板3次(300µL/孔),在吸水纸上拍干孔中的残留液体。(如采用手洗板,应注意加1×Buffer洗板时需要悬空加液,枪头最好不要碰到孔内壁;每次加入Buffer后,静置1min并轻微震荡;拍干时注意每次换新的吸水纸或在纸上干净的区域拍干)
4. 酶标抗体温育:按100µL/孔加入1×酶标抗体, 封板膜封板, 37℃静置温育1h。
5. 洗板:同步骤3,其中洗板次数为5次。
6. 显色:将预先配置好的底物液按100µL/孔加入酶标板中,用封板膜封板, 37℃避光静置温育20min。
7. 终止:按100µL/孔加入终止液。
8. 读数:在酶标仪中测定双波长450/630nm处的OD值,测定应在终止后20min内完成
以BSA标准品的OD值(OD450nm-OD630nm)为因变量Y,以标准品浓度(ng/mL)为自变量X绘制标准曲线,推荐使用四参数Logisitic 数学模型拟合方程: Y=((A-D)/(1+(x/C)^B))+D。将样品OD值(OD450nm-OD630nm)代入标准曲线方程式,计算样品中BSA的含量。
标准品浓度(苍驳/尘尝) | O D 值 ( 1 ) | O D 值 ( 2 ) | 平均值 |
50 | 1.775 | 1.803 | 1.789 |
25 | 1.091 | 0.995 | 1.043 |
12.5 | 0.571 | 0.591 | 0.581 |
6.25 | 0.324 | 0.308 | 0.316 |
3.125 | 0.193 | 0.179 | 0.186 |
1.56 | 0.132 | 0.127 | 0.130 |
0 | 0.072 | 0.088 | 0.080 |
1. 测定BSA含量的容器应专用,防止实验室中BSA污染。
2. 本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断。
3. 试剂盒必须在有效期内使用,试剂盒各组分使用前应充分混匀。
4. 严格遵守说明书的操作方法,必须使用本试剂盒配套的试剂,不可使用自制或其他试剂盒内试剂,以保证准确的检测效果。
5. 注意在不同样本和步骤间及时更换加样槽和吸头,避免交叉污染。
6.最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及试验环境密切相关。&苍产蝉辫;
7.本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。&苍产蝉辫;
8.本试剂盒内终止液为酸溶液,操作时应格外注意。&苍产蝉辫;
9.所有生物样本均具有潜在生物安全风险,使用者应严格按照当地法律和相关规定操作处理和丢弃样本。
问题描述 | 可能原因 | 相应对策 |
标准曲线梯度差 | 吸液或加液不准 | 检查移液器及吸头 |
酶标板洗涤不完颈全 | 保证洗板次数及每孔的洗液用量 | |
显色很弱或无色 | 温育时间太短 | 保证足够的温育时间 |
实验温度不正确 | 使用推荐的温育温度 | |
试剂体积不够或漏加 | 检查吸液及加液过程,保证所有试剂按顺序足量添加 | |
翱顿值读数低 | 酶标仪设置不正确 | 在酶标仪上检查波长和滤光片装置 |
读数前应提前打开酶标仪进行预热 | ||
变异系数大 | 加液不正确 | 检查加液情况 |
酶标板底部有污染 | 检查酶标板底部是否有残留的液体和手印 | |
板孔内有异物或气泡 | 加样前确认板孔内无异物,加样后确认无气泡 | |
背景值高 | 酶标板洗涤不完颈全 | 按说明书推荐的方法进行洗板 |
如果用自动洗板机,请检查所有的加液口和排废液口是否有堵塞 | ||
如果是手洗板,可适当增加洗板次数 | ||
洗液有污染 | 配制新鲜洗液 | |
灵敏度低 | 试剂盒保存不当 | 按说明书要求保存相关试剂 |
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