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货号： HG-CL200

产物介绍：

本试剂盒用于生物制品样本前处理，精准抽提各种生物制品中宿主细胞残留DNA。本试剂盒适用于多种基质缓冲溶液，有效 提取纯化微量的DNA。可与谱新支原体DNA检测试剂盒配合使用。

规格：

100人份

产物组成：

产物储存条件与有限期：

规定储存条件下12个月。

试验所需自备器材和试剂

无水乙醇（分析纯）、1×笔叠厂缓冲液（无惭驳2+和颁补2+，除菌过滤，辫贬7.4）、异丙醇（分析纯）、5M NaCl、1M NaOH、 1M HCl；

涡旋仪、磁力架、迷你离心机、高速离心机、水浴锅/金属浴、移液器；

1.5尘尝无菌低吸附离心管、低吸附吸头、一次性手套。

试验所需自备器材和试剂

试验准备

1、每次试验需要在干净的试剂瓶中用无水乙醇和灭菌的超纯水配制成新鲜的80%乙醇。&苍产蝉辫;

2、单个样本的工作结合液的准备：200µL结合液+9µL糖原+0.2µL酵母tRNA（如果提取酵母DNA，结合液中不加酵母 tRNA）。   

3、洗涤液准备：洗涤液使用前加30mL的无水乙醇，充分混匀后使用，同时做好标记，每次使用后将瓶盖盖紧，以保持瓶中 的无水乙醇含量。 

4、5M NaCl 准备：称取1.4625g NaCl，加入5mL灭菌过的超纯水摇匀，建议分装保存。 

5、水浴锅/金属浴准备：65℃和70℃两个温度。

样本准备

1、样本稀释：如果待检测样本是生物制品纯化过程中的上游中间样本，可能含有较高的DNA含量。为了保证检测的准确性， 使样本的检测值在标准曲线线性范围之内，可以用1×PBS缓冲液对高DNA含量样本进行适当比例稀释后再进行样本提取，一般 可考虑将高DNA含量样本稀释100倍或1000倍。 

2、干粉样本： 一般可考虑将干粉样本稀释成10mg/mL或100mg/mL，再进行提取操作。 

3、pH值要求：使用1M NaOH或1M HCl调整样品的pH至中性（pH6.0~8.0）进行提取。 

4、平行处理：每个样本建议进行叁次顿狈础提取处理。&苍产蝉辫;

5、样品加标：待处理样品的DNA加标浓度为样品核酸浓度的2-10倍为宜，建议样品加标体积不超过待处理样本体积的 1/10。 

6、阴性对照：每次试验需用无模板稀释液（1×笔叠厂缓冲液或顿狈础稀释液）与待测样本一同处理。

操作流程

1、每个待处理样本取100&尘颈肠谤辞;尝于1.5尘尝离心管中，待进一步提取。&苍产蝉辫;

2、每个100µL样本中加入10μ尝 5M NaCl、100μ尝裂解液和10μ尝蛋白酶K，涡旋震荡30s，瞬时离心，65℃孵1h。 

注：单个样本所需蛋白酶碍及裂解液的用量需根据样本蛋白浓度进行调整，具体如下表

接下来操作步骤分为手动提取和机器提取，用户可根据需要选择相应的提取方式进行操作。

手动提取

3、孵育完成后将离心管瞬时离心，之后依次加入209.2μL工作结合液、250μL异丙醇和20μ尝磁珠（磁珠使用前需充分混匀， 确保每次加入的磁珠量均一致，以免造成DNA得率不一致），涡旋振荡10min，快速离心10s。

4、将离心管置于磁力架，轻轻地左右转动，待磁珠聚集于贴近磁力架的管壁后，保持离心管固定于磁力架上，用移液枪吸去 上清，注意不要触碰磁珠。

5、加入500μL洗涤液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），涡旋振荡30s，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。快 速离心10s后将离心管重新置于磁力架上轻轻地左右转动，待磁珠聚集于贴近磁力架的管壁后，静置1min，用移液器小心吸去上清。 

6、加入500μL新鲜配制的80%乙醇，涡旋振荡30s，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。快速离心10s后将离心管重新 置于磁力架上轻轻地左右转动，待磁珠聚集于贴近磁力架的管壁后，静置1min，用移液器小心吸去上清。 

7、为保证尽量吸出残留乙醇，可将离心管快速离心10s后，置于磁力架上用10μ尝移液器吸出残留乙醇。 

8、打开管盖室温干燥3-5min（干燥时间依具体情况进行延长或缩短；肉眼随时注意观察，避免磁珠过分干燥）。   注：干燥过程中磁珠过干或有乙醇残留都会影响样本回收率。干燥也可选择鼓风干燥，一般建议鼓风干燥2min。 

9、将离心管从磁力架取下，每管加入100μ尝洗脱液，涡旋振荡1min，70℃孵育7min，期间每2-3min涡旋混匀一次。 

10、孵育完成后，将离心管高速离心1min，然后静置于磁力架上，待磁珠分离后，用移液器小心转移上清到新的1.5mL离 心管中。

机器提取 （以下仅供参考，需结合核酸自动颈提取仪的具体操作流程）

3、孵育完成后将离心管瞬时离心。按照下述 96 深孔板排布预先加入相应溶液，其中：

• 第3或9列：工作结合液209.2μL/孔、异丙醇250μL/孔、磁珠20μ尝/孔及经消化后的样本。 

• 第4或10列：洗涤液500μL/孔。 

• 第5或11列：80%乙醇500μL/孔。 

• 第6或12列：洗脱液100μ尝/孔。 

注：第3或9列可在其他列试剂全部加完后再加。

4、将仪器电源插头插入220V交流电源，仪器开机后显示初始界面，几秒钟后仪器进入自检状态。整个开机和自检过程需 1~2 min。

5、根据需求进入叁级管理系统的不同层级，点击窗口上部的“运行"进入运行界面，点击紫外灯按钮开关进行紫外线消毒。

6、打开仪器前视窗门，拉出托盘至最外侧，将加好样的96孔深孔板放入仪器中固定位置，放置孔板时须注意其方向(A1位 置为左前位置），将托盘推入最内侧，把磁力套依次插入磁架T型槽内，关闭仪器前视窗门。点击窗口上部的“流程库"选择相 应的程序。点击“编辑"，根据需要修改纯化过程中的时间、温度、溶液体积等参数 

7、程序确认无误后，点击窗口上部的“运行"进入运行界面，点击“开始"按钮，启动流程开始运行，仪器会自动进行处理 直至完成。   注：运行前再次检查磁力套是否插入磁架T型槽内。 

8、运行完成后，拿出96孔深孔板及磁力套。从对应孔中取出纯化完成的样本洗脱液，转移至1.5mL离心管中。 注：若纯化完成的样本洗脱液中残留磁珠，可将核酸纯化液再次高速离心3min，将离心管静置于磁力架上，放置2min，待 溶液澄清用移液器小心转移上清至新1.5mL离心管中。 

9、点击窗口上部的“运行"进入运行界面，点击紫外灯按钮开关进行紫外线消毒，注意关闭仪器前盖。消毒结束后，关闭仪器。

注意事项：

1、实验开始前，为减少污染建议用酒精擦拭台面、移液器、枪头盒等表面。
2、注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染。建议使用带滤芯的枪头。
3、离心机：选择升降速快的离心机，防止离心不充分导致实验失败（尤其是老化的离心机，还有污染的可能性）。
4、所有试剂需平衡至室温，再进行实验。
5、首i次使用前，请按照试剂瓶上标签，在洗涤液中加入指i定体积的无水乙醇，充分混匀后使用，同时做好标记，每次使用 后将瓶盖盖紧，以保持瓶中的无水乙醇含量。
6、在每一步操作时，用左手顺时针方向环握EP管，大拇指轻轻打开管盖，勿将液体溅出。
7、在磁性分离架上分离磁珠时，中途可以适当旋转离心管，使磁珠吸附更加集中。
8、在磁珠洗涤或洗脱过程中，每次振荡混匀后，都要短时间快速离心，以保证没有磁珠液附着在离心管管盖和管壁上。
9、尽量在当天完成样本前处理纯化就立即进行后续DNA检测，以保证检测结果的准确性。 

10、试剂应储存于规定环境下，不同批次试剂盒试剂不建议混用。
11、最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及实验环境密切相关。

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